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反相色譜法檢測食品中維生素E
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方案簡介

我們通常說的維(wei)生(sheng)(sheng)素E,也(ye)稱為生(sheng)(sheng)育酚(fen),即指α-生(sheng)(sheng)育酚(fen),為微黃綠(lv)色透明黏稠(chou)液體,易溶(rong)于(yu)有機溶(rong)劑,不(bu)溶(rong)于(yu)水,對熱穩定(ding),對氧極不(bu)穩定(ding),極易被(bei)氧化。維生素(su)E,是一種性能優良的(de)抗氧(yang)劑(ji)和營養劑(ji),同時具有生物活性高、食用(yong)安(an)全的(de)特點,廣(guang)泛應用(yong)于醫藥、保健品(pin)、食品(pin)、化妝品(pin)等領域(yu),成(cheng)為近(jin)年來備受關注的(de)熱點產品(pin)。

現采用太瑋科技GOWON®DUAL C18進行檢測,文中(zhong)檢測部分(fen)(fen)參照國家標準 GB5009.82-2016食品(pin)中(zhong)維生(sheng)素E的測定方(fang)法(fa),能有(you)效(xiao)把β-生(sheng)育(yu)酚、γ-生(sheng)育(yu)酚同(tong)分(fen)(fen)異構體分(fen)(fen)離,分(fen)(fen)離度>1.5,結(jie)果能滿足檢測要求。


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檢測項目/組分


α-生(sheng)育(yu)酚(fen)(fen)(CAS號(hao)(hao):10191-41-0 )、β-生(sheng)育(yu)酚(fen)(fen)(CAS號(hao)(hao):148-03-8)、γ-生(sheng)育(yu)酚(fen)(fen)(CAS號(hao)(hao):54-28-4)、δ-生(sheng)育(yu)酚(fen)(fen)(CAS號(hao)(hao):119-13-1)

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檢測原理


試樣中(zhong)的(de)維生素E經皂化(含淀粉先用淀粉酶(mei)酶(mei)解(jie))、提取(qu)、凈化、濃(nong)縮后,反相液相色譜柱分離,紫外檢(jian)測器或熒(ying)光檢(jian)測器檢(jian)測,外標法定量。

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標準(zhun)品制備


維生(sheng)(sheng)素(su)E標準溶液(ye)(ye)(ye)(1.00mg/mL):分別(bie)準確稱取(qu)α-生(sheng)(sheng)育(yu)酚、β-生(sheng)(sheng)育(yu)酚、γ-生(sheng)(sheng)育(yu)酚和δ-生(sheng)(sheng)育(yu)酚各50.0mg,用無(wu)水乙醇溶解后(hou),轉移入50mL容量瓶中(zhong),定容至刻度(du),此溶液(ye)(ye)(ye)濃度(du)約為1.00mg/mL。準確吸(xi)取(qu)維生(sheng)(sheng)素(su) E 標準儲備溶液(ye)(ye)(ye)各1.00mL于同(tong)一(yi)50mL容量瓶中(zhong),用甲(jia)醇定容至刻度(du),此溶液(ye)(ye)(ye)中(zhong)維生(sheng)(sheng)素(su) E各生(sheng)(sheng)育(yu)酚濃20μg/mL。

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樣品制備


皂(zao)化:稱取2g~5g(精確(que)至0.01g),樣品用約20mL溫(wen)水(shui)混勻(yun),經均質處理的固體試樣轉(zhuan)入(ru)150mL平底燒瓶(ping)中,加(jia)(jia)(jia)入(ru)0.5g~1g淀粉酶,放(fang)入(ru)60 ℃水(shui)浴避光(guang)恒溫(wen)振蕩(dang)30min后,取出,向(xiang)酶解液(ye)(ye)中加(jia)(jia)(jia)入(ru)1.0g抗(kang)壞血(xue)酸和0.1g 2,6-二叔(shu)丁基對(dui)甲酚,混勻(yun),加(jia)(jia)(jia)入(ru)30mL 無水(shui)乙醇,10mL~20mL氫氧化鉀(jia)溶液(ye)(ye),邊加(jia)(jia)(jia)邊振搖,混勻(yun)后于80℃恒溫(wen)水(shui)浴振蕩(dang)皂(zao)化30min,皂(zao)化后立即用冷(leng)水(shui)冷(leng)卻(que)至室溫(wen)。

提(ti)取(qu):將(jiang)皂化液用 30 mL 水轉入 250 mL 的分(fen)液漏斗中(zhong),加(jia)(jia)入 50 mL 石(shi)油醚-乙醚混(hun)合(he)液,振蕩(dang)萃(cui)取(qu)5min,將(jiang)下(xia)層(ceng)(ceng)溶液轉移至(zhi)另一250mL的分(fen)液漏斗中(zhong),加(jia)(jia)入50mL的混(hun)合(he)醚液再次萃(cui)取(qu),合(he)并醚層(ceng)(ceng)。用約100mL水洗滌醚層(ceng)(ceng),約需重復3次,直至(zhi)將(jiang)醚層(ceng)(ceng)洗至(zhi)中(zhong)性(可用 pH 試紙檢(jian)測下(xia)層(ceng)(ceng)溶液pH值),去(qu)除下(xia)層(ceng)(ceng)水相。

將洗(xi)滌后的醚(mi)(mi)層經無(wu)水(shui)(shui)硫酸鈉(約3g)濾入(ru)250mL旋(xuan)轉(zhuan)蒸(zheng)發瓶或氮(dan)氣(qi)濃(nong)縮管中(zhong),用約15mL石油醚(mi)(mi)沖洗(xi)分液(ye)漏斗及無(wu)水(shui)(shui)硫酸鈉2次(ci),并入(ru)蒸(zheng)發瓶內(nei),并將其接在旋(xuan)轉(zhuan)蒸(zheng)發儀或氣(qi)體(ti)濃(nong)縮儀上,于(yu)40℃水(shui)(shui)浴中(zhong)減壓(ya)蒸(zheng)餾(liu)或氣(qi)流濃(nong)縮,待瓶中(zhong)醚(mi)(mi)液(ye)剩(sheng)下約2mL 時,取下蒸(zheng)發瓶,立即用氮(dan)氣(qi)吹至(zhi)近(jin)干。用甲醇分次(ci)將蒸(zheng)發瓶中(zhong)殘留(liu)物溶解并轉(zhuan)移至(zhi)10mL容量瓶中(zhong),定容至(zhi)刻度(du)。溶液(ye)過0.22μm 有機系濾膜后供高(gao)效(xiao)液(ye)相色譜(pu)測(ce)定。

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色譜條件


色譜柱(zhu):GOWON® DUAL-C18 2.7μm 150×4.6mm(PN:0738-1546)
保(bao)護柱:核殼通用(yong)保(bao)護柱(PN:G2030-K11)
流(liu)動相:甲醇-水(92:8)
流速:1.0 mL/min
檢測器(qi)/波長(chang):DAD / 294 nm
柱溫:20 ℃
進樣量:10 μL

06


色譜圖


供試品圖(tu)譜:

說(shuo)明用(yong)GOWON® DUAL-C18 2.7μm 150×4.6mmPN0738-1546)這款色譜柱能有效把β-生育酚、γ-生育酚同分(fen)(fen)異構(gou)體分(fen)(fen)離(li),分(fen)(fen)離(li)度>1.5,對比其他色譜柱(zhu)AB是不(bu)能把β-生(sheng)育(yu)酚、γ-生育酚(fen)這(zhe)兩個同(tong)分異(yi)構體(ti)分離的。流動(dong)相(xiang)有調整,能更便捷,快速檢定,符合標準要求。

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