許多(duo)檢測(ce)(ce)器(qi)用于(yu)醫藥(yao)實(shi)驗(yan)室質(zhi)量控制(zhi)（QC）分(fen)析(xi)(xi)，如紫(zi)(zi)外(wai)線、熒光(guang)、帶電氣(qi)溶膠、蒸(zheng)發光(guang)散射和示差折光(guang)（RID）檢測(ce)(ce)器(qi)。然而(er)，由于(yu)分(fen)析(xi)(xi)物(wu)的化(hua)學性(xing)質(zhi)不(bu)同，這些檢測(ce)(ce)器(qi)都(dou)不(bu)能(neng)推廣到所有(you)藥(yao)物(wu)的直接(jie)分(fen)析(xi)(xi)。如果紫(zi)(zi)外(wai)和熒光(guang)檢測(ce)(ce)器(qi)對某些藥(yao)物(wu)不(bu)敏感，RID是(shi)最好的選擇。在(zai)大(da)(da)多(duo)QC實(shi)驗(yan)室中，RID在(zai)簡(jian)單性(xing)、成本、能(neng)耗和可用性(xing)方(fang)面具有(you)很大(da)(da)優勢(shi)，且在(zai)食品、化(hua)學和藥(yao)物(wu)分(fen)析(xi)(xi)中有(you)很多(duo)應用，例如檢測(ce)(ce)脂類[1]、碳水化(hua)合物(wu)[2,3]、蛋白(bai)質(zhi)[4]和蛋白(bai)質(zhi)-核酸復(fu)合體[5]。
原理
示(shi)差(cha)折光(guang)檢(jian)(jian)測器(Refractive Index Detector，RID)是(shi)一種通用型(xing)檢(jian)(jian)測器。其原(yuan)理是(shi)待測物與流動相折射(she)率差(cha)。對于(yu)偏轉(zhuan)式(shi)示(shi)差(cha)折光(guang)檢(jian)(jian)測器，光(guang)路在通過兩(liang)(liang)個裝有不(bu)同液體的(de)檢(jian)(jian)測池(chi)時(shi)發生偏轉(zhuan)，偏轉(zhuan)的(de)大小(xiao)與兩(liang)(liang)種液體之(zhi)間折光(guang)率的(de)差(cha)異成比例。光(guang)路的(de)偏轉(zhuan)由光(guang)敏元件上的(de)位移測得，顯示(shi)了折光(guang)率的(de)不(bu)同。
1.光(guang)束 2.樣(yang)品(pin)池 3.參(can)比池 ;4.ns>nr時的光(guang)束 5.ns=nr時的光(guang)束 6.位移 7.光(guang)敏接(jie)收(shou)原件ns樣(yang)品(pin)腔(qiang)中液(ye)體(ti)的折(zhe)射率 nr參(can)比腔(qiang)中液(ye)體(ti)的折(zhe)射率
光學系統
從鎢燈發射出的光束(shu)經(jing)過(guo)聚光透(tou)鏡，狹(xia)縫(feng)1，準直鏡和狹(xia)縫(feng)2，再(zai)透(tou)過(guo)檢測池(chi)，然后光被(bei)檢測池(chi)后的反光鏡反射，再(zai)通過(guo)檢測池(chi)、狹(xia)縫(feng)2、準直鏡和零(ling)位玻璃調(diao)節器后在光敏元(yuan)(yuan)(yuan)件上(shang)顯示出狹(xia)縫(feng)1的影(ying)象。光敏元(yuan)(yuan)(yuan)件上(shang)有兩個并排的光敏接收元(yuan)(yuan)(yuan)件。
1.鎢(wu)燈 2.聚光(guang)透(tou)鏡 3.狹(xia)縫1 4. 準(zhun)直鏡5. 狹(xia)縫26.檢測池 7. 反光(guang)鏡 8. 零位玻璃(li) 9.光(guang)接(jie)收元件
注意事項
當流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)中(zhong)含有高濃度的(de)(de)(de)(de)鹽時，用(yong)完后一(yi)定要(yao)(yao)用(yong)水徹底的(de)(de)(de)(de)沖洗，否則將會(hui)由(you)于堵塞流(liu)(liu)(liu)路而中(zhong)斷檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)(de)(de)(de)工(gong)作(zuo)。不要(yao)(yao)使用(yong)任何可(ke)能腐蝕材料（比(bi)如不銹鋼）的(de)(de)(de)(de)流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)，包括(kuo)鹽酸。使用(yong)這種(zhong)流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)可(ke)能引起基線漂移，損害檢(jian)測(ce)器(qi)。用(yong)徹底脫氣過的(de)(de)(de)(de)流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)，單元泵（預混合流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)）。溫度、壓(ya)力和流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)組成的(de)(de)(de)(de)微(wei)小變(bian)化會(hui)產生極(ji)大(da)的(de)(de)(de)(de)影(ying)響，應控制(zhi)其變(bian)化，保持(chi)穩(wen)(wen)定性，減少基線噪音。RID的(de)(de)(de)(de)系統(tong)沖洗平衡(heng)，需要(yao)(yao)保證流(liu)(liu)(liu)路中(zhong)的(de)(de)(de)(de)流(liu)(liu)(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)被完全替換，使儀器(qi)達到完全穩(wen)(wen)定，充分平衡(heng)基線。現采用(yong)太瑋科技Prevail Carbohydrate ES和JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+ 色譜柱利用(yong)RID進行蜂蜜(mi)和甘露醇中(zhong)糖(tang)成分的(de)(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)，文中(zhong)檢(jian)測(ce)標(biao)(biao)準(zhun)參考2020版中(zhong)國藥(yao)典(dian)一(yi)部 二部方(fang)法，測(ce)得柱效N＞2000，分離(li)度＞2， 符合標(biao)(biao)準(zhun)要(yao)(yao)求。
應用一
蜂蜜：果糖、葡萄(tao)糖、蔗糖、麥芽糖色(se)譜柱：Prevail Carbohydrate ES 150×4.6mm，2.7μm P/N：9243-1546檢(jian)測器：RID流動相：乙腈(jing)-水（82：18）預混合(he)柱溫(wen)：室溫(wen)進樣量：15μL流速：1mL/min
對照品(pin)譜圖：
應用二
甘露醇 山梨醇色譜柱：JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+ 8% 300mm×7.8mm P/N：0219-3078檢測器：RID流動相(xiang)：水柱溫：80℃進(jin)樣(yang)量：20μL流速：0.5mL/min對照品(pin)譜圖：
結論
Prevail Carbohydrate ES是專為(wei)分(fen)離單糖(tang)和雙糖(tang)類物(wu)質而設計(ji)的(de)(de)產品，一(yi)般使用(yong)乙腈(jing)水溶液作(zuo)為(wei)流(liu)動相，兼容 ELSD，低柱流(liu)失(shi)；JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+色(se)(se)譜(pu)柱用(yong)于單糖(tang)、糖(tang)醇、雙糖(tang)等物(wu)質的(de)(de)分(fen)離，具有流(liu)動相簡單，高性(xing)能色(se)(se)譜(pu)柱。
參考文獻(xian)[1] A.I. Hopia, V.-M. Ollilainen, Comparison of the evaporative light scattering detector (ELSD) and refractive index detector (RID) in lipid analysis, J. Liq. Chromatogr. 16 (12) (1993) 2469–2482.[2] D.O. Hancock, R.E. Synovec, Microbore liquid chromatography and refractive index gradient detection of low-nanogram and low-ppm quantities of carbohydrates, J. Chromatogr. A. 464 (1991) 83–91.[3] J.L. Ch′avez-Serv?n, ? A.I. Castellote, M.C. L′opez-Sabater, Analysis of mono- and disaccharides in milk-based formulae by high-performance liquid chromatography with refractive index detection, in, J. Chromatogr. A, Elsevier 1043 (2) (2004) 211–215.[4] J. Wen, T. Arakawa, J. Wypych, K.E. Langley, M.G. Schwartz, J.S. Philo, Chromatographic determination of extinction coefficients of non-glycosylated proteins using refractive index (RI) and UV absorbance (UV) detectors: applications for studying protein interactions by size exclusion chromatography with light-scattering, UV, Tech. Protein Chem. 8 (1997) 113–119.[5] E. Folta-Stogniew, Characterization of Protein–Nucleic Acid Complexes by SizeExclusion Chromatography Coupled with Light Scattering, Absorbance, and Refractive Index Detectors, in: Methods Mol. Biol., Humana Press Inc., 2021: pp. 381–395.
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