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《2020版中國藥典四部》黃曲霉毒素測定法
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方案簡介

黃曲霉毒素Aflatoxins, AFT)是由黃曲霉和寄生曲霉的某些菌株產生的一種雙呋喃環類毒素,其結構中含有二呋喃環和氧雜萘鄰酮,具備很強的毒性、致畸性、致癌性和致突變性。黃曲霉毒素主要存在于土壤、堅果,特別是花生和核桃中。在玉米、大豆、稻谷、牛奶、奶制品、食用油等食品中會有黃曲霉毒素檢出,一般以熱帶和亞熱帶等南方高溫、高濕地區受污染最為嚴重。黃曲霉毒素耐熱,一般烹調加工溫度下難以破壞。

 

黃曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2、M1、M2,農業農村部、國家質檢總局和市場監督管理局一致規定黃曲霉毒素是相關食品的必檢項目之一。本文參考《GB 2761-2017 食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》、《GB 5009.22-2016 食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》第三法 高效液相色譜-柱后衍生法、《2020版中國藥典四部》黃曲霉測定方法,使用黃曲霉總量免疫親和小柱(PN: 60301-1020)凈化,AF C18 II(PN: 0397-2546)進行分離,結合高效液相色譜光化學柱后衍生對黃曲霉毒素進行分析,靈敏度高,分離度優,滿足標準要求。

 

樣品制備:

1.樣品提取:稱取 5g 試樣(精確至 0.01g)于 50mL 離心管中,加入 1g 氯化鈉和 25mL70%甲醇水溶液,渦旋混勻,置于超聲波中振蕩 10min,在 6000r/min 下離心 10min, 10mL上清液,加 20mL 水稀釋,混勻,用玻璃纖維濾紙過濾,收集濾液備用。

2.樣品凈化:將低溫下保存的黃曲霉毒素總量免疫親和柱恢復至室溫,取上述濾液 15mL, 1-2 滴/秒的速度通過免疫親和柱,棄去流出液;加 10mL 水清洗免疫親和柱,棄去流出液并排干免疫親和柱內所有液體;加入 1mL 甲醇緩慢洗脫,收集洗脫液,定容,用0.22μm 微孔濾膜過濾,作為待測溶液,HPLC 測定。

 

色譜條件:

色譜柱:JADE-PAK 5μm AF C18 II 250×4.6mm

產品貨號:0397-2546

流動相:

A:乙腈:甲醇(50:50)

B:水

A:B = 32:68

流速:1.0ml/min

柱溫:40℃

檢測波長:激發波長 360nm,發射波長 440nm

進樣體積:20μL