末端吸收定義:
1、待(dai)測組分(fen)沒有共軛結構(沒有π-π*躍遷吸收光)
2、待(dai)測組分存在氧(yang)、硫、鹵素(su)、氮等原子(zi)(n→σ*或n→π*躍遷(qian)吸(xi)收(shou)光(guang))
3、檢測波(bo)長(chang)<待測組(zu)分(fen)截(jie)止波(bo)長(chang)
4、通常≤230nm
關(guan)于末端吸收組(zu)分,檢測時常(chang)出(chu)現的問題(ti):基線噪音大,平(ping)衡時間長;不(bu)(bu)(bu)出(chu)峰或響(xiang)應值低的問題(ti);幾個(ge)月后再做相(xiang)同(tong)實驗(yan)相(xiang)同(tong)濃度樣品(pin)峰面積變(bian)小(甚至不(bu)(bu)(bu)出(chu)峰);幾個(ge)月后新買色譜柱基線再也平(ping)衡不(bu)(bu)(bu)了,漂(piao)移嚴(yan)重。
很多客戶第一懷疑對象便是色譜柱質(zhi)量問題(ti),出現這種現象,其(qi)原因其(qi)實最可(ke)能(neng)在于儀(yi)器本身,比如(ru)有機(ji)溶劑(ji)選(xuan)擇不(bu)當(dang),流動相緩(huan)沖(chong)鹽(yan)選(xuan)擇不(bu)當(dang),流動相試劑(ji)級別、品質(zhi)和配制問題(ti),流動相混合方式,氘燈(deng)能(neng)量不(bu)足。所以(yi)遇到(dao)這類問題(ti),不(bu)能(neng)盲目的判定(ding),要從各個方面分析(xi)問題(ti)所在。
其中(zhong)氘(dao)燈(deng)能(neng)量問題在(zai)末端吸(xi)收組分檢(jian)測中(zhong)尤為常見,且影響頗(po)深。因此實驗中(zhong)我們需要(yao)密(mi)切(qie)關注氘(dao)燈(deng)使(shi)用(yong)時(shi)(shi)長及(ji)點燈(deng)次數,能(neng)量值會(hui)(hui)直(zhi)接影響220nm波長以下(xia)(xia)物質的檢(jian)測結果,通常氘(dao)燈(deng)使(shi)用(yong)在(zai)2000小時(shi)(shi)內,不會(hui)(hui)出現(xian)問題,超過則需要(yao)密(mi)切(qie)注意,當能(neng)量不足時(shi)(shi),波長越低,峰響應值會(hui)(hui)越小,基(ji)線噪音(yin)更大,更難平衡,若樣品濃度同樣低情況下(xia)(xia),甚至(zhi)出現(xian)不出峰現(xian)象(xiang),請看下(xia)(xia)面(mian)案例(li):
氘燈能(neng)量直接關(guan)聯峰響應值(zhi)及(ji)基線(xian)
案例1:有(you)機酸(suan)檢(jian)測
色譜(pu)柱:GOWON Polar-MS 2.7um 150x4.6mm (PN : 0737-1546)
流動(dong)相:乙腈-0.1%磷(lin)酸溶(rong)液(ye)(2 : 98)
流速:1ml/min
柱溫:25℃
檢測波長:210nm
進樣量:1ul
指標組分:甲酸(suan)(suan)、乙酸(suan)(suan)、檸檬(meng)酸(suan)(suan)
儀器:Thermo U3000
同(tong)樣(yang)波長(chang)(chang)下,同(tong)型號(hao)儀(yi)器(U3000),氘燈(deng)使(shi)用時長(chang)(chang)不同(tong),氘燈(deng)能量(liang)對(dui)比
基(ji)線噪音(yin)對比(bi):
以上(shang)圖(tu)譜(pu)中,甲酸、乙(yi)酸、檸(ning)檬酸濃度一(yi)致(zhi),進樣(yang)量一(yi)致(zhi),用同型(xing)號的兩臺儀器(qi)測(ce)試,對(dui)比(bi)可看出(chu),氘燈能量越低,峰響應值越低,基線(xian)噪(zao)音越大。
相同系統,相同氘燈(deng),設置其(qi)他波長(chang)正(zheng)常
案例2:不同波段(duan)溶(rong)劑峰(feng)測試
色(se)譜柱:GOWON C18 2.7um 50x4.6mm (PN : 0726-0546)
流動相:乙腈-水(65 : 35)
流速:1ml/min
柱溫:25℃
檢測波(bo)長:全波(bo)長3D掃描(提取210nm、205nm、200nm、195nm、254nm信號)
儀器:Thermo U3000
檢測器:DAD
溶劑:甲醇
進(jin)樣量:2ul、4ul、6ul、8ul、10ul
分別(bie)設置(zhi)5種不同進(jin)樣量(liang),提取5個不同波長數據,觀(guan)察溶劑(ji)峰(feng)峰(feng)高變化趨(qu)勢(shi),以上曲線中,橫坐(zuo)標為進(jin)樣量(liang),縱坐(zuo)標為甲醇峰(feng)高,波長越低(di),相同樣品量(liang)紫外檢測器的響應值越高,樣品量(liang)變化引起響應值變化越明顯!
表明,波(bo)長(chang)(chang)大小直接影響基線,對(dui)低波(bo)長(chang)(chang)下,更(geng)加靈敏(min),因此(ci),末端吸收(shou)條件下,要更(geng)加注意氘燈(deng)的(de)能(neng)(neng)量值,只有保證能(neng)(neng)量充足,才能(neng)(neng)夠(gou)更(geng)加準確的(de)檢出。
關于(yu)氘燈(deng)的(de)建議:
1、關注氘(dao)燈(deng)(deng)的(de)能(neng)量值,使用末端吸收檢測波長(chang)時,對氘(dao)燈(deng)(deng)能(neng)量有更高的(de)要求!
2、關注氘燈使用(yong)時(shi)長,超過2000h則需注意能量(liang)值是否足夠;
3、點燈(deng)次(ci)數太頻繁(fan)也會(hui)對氘(dao)燈(deng)能量有一定影(ying)響;
4、開機時(shi),先保證有流動相流過檢測器,再(zai)打開紫(zi)外(wai)燈,關機時(shi),先關閉(bi)紫(zi)外(wai)燈,再(zai)通泵,避免紫(zi)外(wai)燈干燒;
5、使用(yong)(yong)原廠氘燈,會有(you)更(geng)高能量(liang)值和(he)更(geng)長使用(yong)(yong)壽(shou)命;
5、長期(qi)使用非(fei)原廠替代氘燈,會(hui)影(ying)響(xiang)檢(jian)測器的靈敏度和穩定性。